El desarrollo de este procedimiento está sujeto a una serie de pasos. En primer lugar, se procedió a la preparación de una construcción genética que contiene un fragmento del genoma de CVYV-AlLM (aislado viral de una planta de melón procedente de Almería, infectada por el virus). Para el clonaje molecular de un DNA complementario (cDNA) a un fragmento del genoma del virus, se diseñaron dos oligonucleótidos cebadores (MA162 y MA163) que se usaron en un experimento de RT-PCR. Como molde para la síntesis del cDNA se utilizó un extracto de RNA de plantas infectadas por CVYV-AlLM. El plásmido que contiene este inserto se ha denominado pLMCVYV. A partir de este plásmido pLMCVYV se sintetizaron las sondas de RNA complementario (cRNA) al RNA viral por su mejor rendimiento con respecto a otros tipos de sondas. El cRNA se preparó mediante una reacción estándar de transcripción in vitro. La hibridación molecular en extractos de ácidos nucleicos de plantas se realizó aplicando un ml de extractos de RNA total de plantas sobre una membrana de nylon cargada positivamente, los ácidos se fijaron mediante exposición a luz ultravioleta. A continuación la membrana se sometió a un proceso estándar de prehibridación, hibridación con la sonda preparada y lavados. La detección de la sonda hibridada al RNA viral presente en los extractos de ácidos nucleicos se realizó por quimio-luminiscencia. Las improntas de secciones de tejidos de plantas, utilizadas en la hibridación molecular, se prepararon a partir de tallos, peciolos y venas mayores de hojas de plantas seccionados con cuchilla. Para evitar contaminaciones, cada sección se realizó con una cuchilla estéril y distinta. Las secciones así preparadas se aplicaron sobre una membrana de nylon cargada positivamente hasta que las gotas de savia exudadas se absorbieron. Una vez realizadas estas aplicaciones, se mantuvo la membrana a temperatura ambiente hasta que se secó. El control del virus mediante el control de su vector es una estrategia que ya se ha revelado insuficiente en otros casos de virus transmitidos por mosca blanca, de tal manera que es imprescindible el uso de estrategias alternativas. Entre éstas se cuenta con el manejo de determinadas prácticas culturales como el uso de material de propagación libre de virus y el uso de cultivares genéticamente resistentes al virus, para las cuales es necesario disponer de métodos de detección del virus que sean específicos, sensibles y rápidos. ir a cultivos: virus y manejo